Контроль ифа что это

Коронавирусная инфекция:
есть или нет?

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Иммуноферментный и иммунохемилюминесцентный анализ

Тест позволяет выявить стадию заболевания и пациентов с бессимптомным течением болезни

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Самые ранние антитела,
которые появляются при первой
иммунной реакции организма
на внедрение вируса
и указывают на то,
что заболевание протекает
на данный момент

Вырабатываются позже и
остаются надолго. Это
говорит о формирующемся
иммунитете

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

для записи следует обратиться лично в одну из поликлиник округа вашего проживания на стойку информации, администратор поликлиники вас запишет при наличии свободных мест.

НЕОБХОДИМО ОБРАТИТЬСЯ В СПРАВОЧНУЮ СЛУЖБУ 122, там вам подскажут адреса поликлиник, в которых проходит взятие анализа.

Подробно узнать о правилах проведения тестирования и
записаться можно, перейдя по ссылке:

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

При столкновении с вирусом в организм человека попадают его частицы – инородные белки, один из них – белок N. В ответ организм начинает вырабатывать антитела к нему. Так формируется естественный иммунитет к вирусу.

Вакцина «Спутник–V» разработана на основе S-белка. Это маленькая неживая частица ДНК-вируса, не опасная для человека. Но организм распознает ее как коронавирус и начинает вырабатывать соответствующую защиту – так формируется иммунитет после прививки. Антитела в этом случае вырабатываются определенного типа: именно к S-белку.

Тест-системы, которые используются в городских ИФА-центрах, распознают антитела к N-белку, то есть показывают, сталкивался ли человек непосредственно с вирусом. Именно поэтому тест, сделанный в городском ИФА-центре, не сможет показать, сформировался ли иммунитет после вакцинации, но покажет иммунитет после заболевания, не важно переболел человек с симптомами или без.

Узнать, болели ли вы бессимптомно. Так как многие люди болеют бессимптомно, для них единственный способ узнать, болели ли они коронавирусом и выработал ли организм иммунитет – это сдать ИФА-тест в городской поликлинике.

Узнать свой уровень антител после болезни. Тем, кто явно переболел коронавирусом, тестирование на ИФА в городской поликлинике поможет узнать, какой уровень антител выработался после болезни. Это поможет принять решение о вакцинации – в случае если антител мало. Или о том, чтобы стать донором, если антител много.

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

ЕСЛИ ВЫ ПОЧУВСТВУЕТЕ СЕБЯ ПЛОХО —
НЕЗАМЕДЛИТЕЛЬНО ВЫЗЫВАЙТЕ ВРАЧА НА ДОМ

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

В СЛУЧАЕ ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ М ≥ 2 и G СВЯЗЫВАЕТСЯ СПЕЦИАЛИСТ И СООБЩАЕТ ЕМУ О РЕЗУЛЬТАТАХ, НЕОБХОДИМОСТИ САМОИЗОЛЯЦИИ И СКОРОМ ПОСЕЩЕНИИ ВРАЧА. ЗВОНОК ПРОИСХОДИТ С НОМЕРА 8(499) 940-18-30 c 9:00 до 23:00.

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

ДАЖЕ ПРИ ОТСУТСТВИИ СИМПТОМОВ, ХАРАКТЕРНЫХ ДЛЯ COVID-19, ВРАЧ ИЗ ПОЛИКЛИНИКИ ПО МЕСТУ ВАШЕГО ФАКТИЧЕСКОГО ПРЕБЫВАНИЯ (ЛИБО ЖИТЕЛЬСТВА) ПОСЕТИТ ВАС ДОМА В БЛИЖАЙШИЕ ДНИ:

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

В СЛУЧАЕ ЕСЛИ У ВАС ПОЯВЯТСЯ СИМПТОМЫ ЗАБОЛЕВАНИЯ, К ВАМ НАПРАВЯТ ВРАЧА ИЗ ПОЛИКЛИНИКИ. ВРАЧ НАЗНАЧИТ ИЛИ ИЗМЕНИТ СХЕМУ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ.

ХАРАКТЕРНЫЕ ДЛЯ COVID-19 СИМПТОМЫ:

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

КРОМЕ ТОГО, НА ВАШ ТЕЛЕФОННЫЙ НОМЕР БУДЕТ ОТПРАВЛЕН КОД АКТИВАЦИИ ТЕЛЕМЕДИЦИНСКОГО СЕРВИСА, ПОДКЛЮЧИВШИСЬ К КОТОРОМУ ВЫ СМОЖЕТЕ ПОЛУЧАТЬ КОНСУЛЬТАЦИИ ВРАЧЕЙ КРУГЛОСУТОЧНО.

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

ПО ЗАВЕРШЕНИИ 14-ДНЕВНОГО ПЕРИОДА, ПРИ УСЛОВИИ ОТСУТСТВИЯ КЛИНИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ЗАБОЛЕВАНИЯ ВЫ СМОЖЕТЕ ПРЕКРАТИТЬ РЕЖИМ САМОИЗОЛЯЦИИ.

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Отзывы собираются анонимно и предназначены для поиска ошибок на сайте. Ответы на отзывы не предусмотрены.

Источник

ИФА и ПЦР: просто о сложных лабораторных методах диагностики инфекций

Опубликовано 29 ноября 2014 пользователем a.ultanbay

В лабораторной диагностике существует множество методов выявления необходимого элемента в биоматериале. Для диагностики инфекционных заболеваний чаще всего используют два принципиально разных метода: ИФА и ПЦР. Мы предлагаем Вам ознакомиться с данными методами, чтоб понять плюсы и минусы каждого из них.

ПЦР – один из самых наукоемких методов. Он обнаруживает ДНК микроорганизма. Генетический материал индивидуален для любого микроба, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью и не может «обознаться». Принцип ПЦР заключается в том, что в пробирке происходит многократное удвоение искомого генетического кода. В случае присутствия даже незначительного количества этого кода, произойдет увеличение его количества, и анализатор сможет «уловить» его наличие. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Однако, у этого метода есть и свои минусы. Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, с уретры или из носа). Во-вторых, за счет своей высокой чувствительности, ПЦР может обнаружить даже мертвые частицы микробов, что наблюдается сразу после лечения. В таком случае, результат будет ложноположительный.

Резюмируя вышесказанное, приведем таблицу сравнения этих двух методов друг с другом:

Источник

Иммуноферментный анализ

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:

В реакции участвуют:

Твердая фаза

В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.

Антигены и антитела

АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант.
Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2).
Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.

Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.

Субстраты

Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.


Классификация ИФА

В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:

1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:

2 — по принципу определения исследуемого вещества:

3 — по типу результатов:


Конкурентный ИФА

Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.


Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФА

Основным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.

Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).

Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза.
Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.

Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.

Образцы рассматриваются как:

Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.


Методом ИФА определяют
:

Источник

Что такое ИФА и для чего он применяется?

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что этоИФА — иммуно — ферментный анализ, отличающийся высокой информативностью и точностью результатов, при достаточной оперативности и безболезненности проведения.

Иммуно ферментная диагностика поступила в арсенал медицинских специалистов в 60 — х годах прошлого столетия. На тот момент это был очень сложный, но перспективный анализ. С высоты прошедших десятилетий можно уверенно сказать, что предполагаемый потенциал ИФА раскрылся в полной мере.

Какова область применения ИФА?

Область применения рассматриваемого метода диагностики в современной медицине достаточно широка, при этом основными направлениями являются:

Как работает рассматриваемый метод диагностики?

Метод ИФА использует два основных инструмента: иммунная реакция и ферментная реакция, на практике оба инструмента взаимодействуют, обеспечивая желаемый результат и высокую информативность. Иммунная реакция широко применяется для поиска причин возникновения болезни, болезнетворных бактерий и микробов. В вою очередь, ферментная реакция используется для того, чтобы перевести полученные результаты в форму, доступную для исследований и измерений.

Для диагностики каких заболеваний применяется рассматриваемый метод?

С помощью ИФА можно подтвердить или опровергнуть наличие у человека большого количества заболеваний, наиболее распространенными на сегодняшний день являются:

Как осуществляется подготовка к проведению такого анализа?

Для того, чтобы результаты рассматриваемого метода диагностики оказались достаточно достоверными, «разговорчивыми» и информативными, пациенту следует помнить о правилах забора крови для проведения анализа. Наиболее значимыми, обязательными к соблюдению, являются:

Каковы сроки выполнения такого анализа?

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что этоПосле забора крови результат будет доступен пациенту в течение двух суток, то есть выполняется такой анализ достаточно быстро, несмотря на определенную сложность исследования.

Подводя итог, хочется сказать следующее: иммуно — ферментный анализ — достаточно эффективное, высокоточное исследование, отличающееся высокой информативностью при высокой оперативности проведения.

Сдать кровь на ИФА вы можете в нашей клинике

Источник

Научная электронная библиотека

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,

3.2.3. Иммуноферментный метод (ИФА)

Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) – лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала.

Твердофазный ИФА был предложен в 1971 году. Основные принципы твердофазного ИФА, независимо от модификации, заключаются в следующем:

1. На 1 этапе реакции адсорбируют антигены или антитела на твердой фазе. При этом не связавшиеся с твердой фазой реагенты легко удаляются отмыванием.

2. В сенсибилизированных лунках инкубируют исследуемый образец. В лунках с положительным контролем – стандартные реагенты. При этом на поверхности твердой фазы формируются иммунные комплексы. Несвязавшиеся компоненты удаляют отмыванием.

3. При добавлении конъюгата антитело-фермент или антиген-фермент и связывании его с иммобилизованным иммунным комплексом активный центр фермента остается доступным для последующего взаимодействия с субстратом. Инкубация субстрата в лунках с иммобилизованным конъюгатом приводит к развитию цветной реакции. Эту реакцию можно остановить на нужной стадии, выраженность окрашивания можно оценить визуально или по оптической плотности.

Из-за разнообразия объектов исследования – от низкомолекулярных соединений до вирусов и бактерий, и многообразия условий проведения ИФА существует большое количество вариантов этого метода.

Одним из принципов классификации методов ИФА является их разделение по типу проводимых на каждой из иммунохимических стадий реакций. В соответствии с эти все методы можно разделить на две группы –
гомогенные и гетерогенные. Если в ходе выполнения анализа все реакции, включая ферментативную стадию, протекают в растворе, то метод является гомогенным. Гетерогенный ИФА объединяет методы, в которых анализ проводится в двухфазной системе, при этом разделение на фазы может происходить на любой стадии определения [16].

В настоящее время EMIT (гомогенный ИФА) широко распространен во всем мире наряду с твердофазным ИФА (тИФА). EMIT по сравнению с тИФА является более экспрессным (до 2-х минут) и менее трудоемким, хотя менее чувствительный, и поэтому используется только в качественном анализе.

Возможна также классификация по типу иммунохимического взаимодействия на первой стадии анализа (в которой происходит связывание определяемого вещества). Если в системе присутствуют только анализируемое соединение и соответствующие ему центры связывания (антиген и специфические антитела), то метод является неконкурентным. Если же на первой стадии в системе одновременно присутствует анализируемое соединение и его аналог (меченное ферментом анализируемое соединение или анализируемое соединение, иммобилизованное на твердой фазе), конкурирующие за ограниченное количество центров специфического связывания, то метод является конкурентным.

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Рис. 10. Конкурентный (а) и неконкурентный (б) ИФА

Примером неконкурентного формата ИФА является «сэндвич»-метод. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. В процессе инкубации на первой стадии на твердой фазе образуется комплекс антиген-антитело. Затем носитель отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом специфические антитела. После вторичной инкубации и удаления избытка конъюгата антител с ферментом определяют ферментативную активность носителя, которая пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена. На стадии выявления специфического иммунокомплекса антиген оказывается как бы зажатым между молекулами иммобилизованных и меченных антител, что послужило поводом для широкого распространения названия «сэндвич»-метод.
Ферментативная реакция (цветная реакция) проходит в присутствии перекиси водорода и субстрата, представленного неокрашенным соединением, которое в процессе пероксидазной реакции окисляется до окрашенного продукта реакции на заключительном этапе проведения исследования. Интенсивность окрашивания зависит от количества выявленных специфических антител. Результат оценивается спектрофотометрически или визуально.

«Сэндвич»-метод может быть использован для анализа только тех антигенов, на поверхности которых существуют, по крайней мере, две антигенные детерминанты. На этом формате основано большое количество тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, цитомегаловирусная, герпесная, токсоплазменная и другие инфекции.

Другим типом классификации схем ИФА является разделение по типу определения концентрации анализуемого вещества:

1) прямое определение образовавшихся иммунокомплексов (аналитический сигнал прямо пропорционален концентрации определяемого вещества) – прямой ИФА;

2) определение концентрации оставшихся свободными, т.е. не вступившими в реакцию компексообразования антител – непрямой ИФА.

Так, среди конкурентных схем твердофазного ИФА существует два основных формата:

Прямой конкурентный формат ИФА использует в качестве меченного ферментом реагента одного из участников иммунохимической реакции (рис. 3) – определяемое соединение или специфический к нему диагностический реагент (антитела). В результате схема ИФА состоит из 3-х стадий:

– сорбции (иммобилизации) специфических антител, либо конъюгата антигена,

– аналитической стадии: конкурентной реакция Аг-Ат с участием меченого ферментом реагента (антигена или антител),

– фермент-субстратной реакции, в результате которой образуется окрашенный (или люминисцентный) продукт.

Например, на полистирольный планшет иммобилизуют специфические антитела (рис. 11 в) иммобилизованые на твердой фазе специфические антитела. На второй стадии к иммобилизованным антителам добавляют раствор, содержащий определяемое вещество и фиксированную концентрацию меченого антигена, инкубируют и после отмывки носителя от несвязавшихся компонентов регистрируют ферментативную активность образовавшихся на твердой фазе специфических иммунных комплексов. В этой схеме меченый ферментом и немеченый антиген конкурируют за связывание с иммобилизованными специфическими антителами.

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Рис. 11. Виды конкурентного ИФА:
а – непрямой конкурентный ИФА с иммобилизацией конъюгата антигена с высокомолекулярным веществом и использованием меченых антивидовых антител; б – непрямой конкурентный ИФА с иммобилизацией конъюгата антигена с высокомолекулярным веществом и использованием меченых специфических антител; в – прямой конкурентный ИФА с иммобилизацией специфических антител и использованием меченого антигена (аналита)

Преимуществом прямой схемы является небольшое число стадий, что позволяет легко автоматизировать анализ. К недостаткам схемы относятся сложность методов синтеза ферментных конъюгатов, а также возможное влияние компонентов образца на активность фермента.

В непрямом конкурентном формате ИФА используются меченные ферментом антитела (специфические или вторичные) и иммобилизованный на твердой фазе конъюгат антиген-белок-носитель
(рис. 11 а, б). Непрямая схема с использованием меченых антивидовых антител является одной из наиболее распространенных схем ИФА (рис. 11 а). На поверхности носителя иммобилизуют конъюгат антиген-белок, к которому добавляют раствор, содержащий определяемый антиген и фиксированную концентрацию немеченых специфических антител, инкубируют и после удаления несвязавшихся компонентов добавляют фиксированную концентрацию меченых антивидовых антител. После инкубации и отмывки носителя детектируют ферментативную активность образовавшихся на твердой фазе специфических иммунных комплексов. Величина аналитического сигнала в этом случае находится в обратно-пропорциональной зависимости от концентрации определяемого антигена.

Применение универсального реагента – меченых антивидовых антител – даёт возможность выявлять антитела к разным антигенам. Кроме того, анализируемый образец и меченый реагент вводятся в систему на разных стадиях, что устраняет влияние различных эффекторов, содержащихся в образце, на каталитические свойства ферментной метки. Однако такая схема анализа усложняет его проведение из-за введения дополнительных стадий.

ИФА наркотических веществ и их метаболитов в биологических жидкостях и тканях широко используется в ХТЛ, бюро судмедэкспертизы, клинико-диагностических лабораториях, медицинских центрах. Чаще всего применяется полуколичественный вариант методики, т.к. в большинстве случаев необходимо дать заключение о том, превышает ли уровень метаболитов ПАВ в образце определенную пороговую концентрацию. Однако метод ИФА может использоваться (и используется в некоторых случаях) для количественного определения метаболитов ПАВ с высокой чувствительностью – до 10–9 г/л.

Отдельно следует выделить иммунохимический метод выявления фактов употребления наркотиков в отдаленные промежутки времени (до 4 месяцев после последнего употребления ПАВ), основанный на определении антител к наркотическим веществам в крови человека [4, 5]. Данный метод использует прямую неконкурентную схему ИФА.

Компоненты, используемые в ИФА

Ферментные метки обладают чрезвычайно мощным каталитическим действием, одна молекула фермента может реагировать с большим количеством молекул субстрата. Таким образом, фермент, присутствующий в ничтожных количествах, можно выявить и количественно определить по образованию продуктов катализируемой им реакции. Другое преимущество применения ферментов в качестве меток обусловлено наличием в молекуле многочисленных функциональных групп (сульфгидрильных, карбоксильных, остатков тирозина и др.), через которые можно ковалентно присоединить молекулы лиганда.

В ИФА может использоваться не менее 15 различных ферментов. Наибольшее применение, в соответствии с вышеназванными требованиями, нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфотаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза. Все три стабильны и катализируют высокочувствительные реакции. Кроме того, продукты, получаемые в результате реакций, катализируемых этими ферментами, в зависимости от используемого субстрата, могут выявляться не только колориметрическими методами, но также флуоресцентными методами. Другие ферменты используются значительно реже. Это объясняется их более низкой в сравнении с ПХ и ЩФ удельной активностью.

Выбор субстрата в первую очередь определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция фермент-субстрат высоко специфична.

Чаще используют хромогенные субстраты, которые, разрушаясь, образуют окрашенное вещество. Перспективным является использование высокоэнергетических субстратов – флуоресцентных, хемилюминесцентных.

3. Антигены и антитела.

Аг и Aт, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. Кроме того, Аг должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант и гомогенностью. Многие синтетические и рекомбинантные Аг вирусов и бактерий хорошо себя зарекомендовали при использовании в ИФА. Это существенно повысило специфичность и воспроизводимость метода за счет сведения к минимуму перекрестных реакций.

Одним из наиболее важных реагентов в ИФА являются антитела. Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые антитела могут быть поли- или моноклинальными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgGl, IgG2), антиаллотипическими или антиидиотипическими. При низкой аффинности Ат распад комплекса Аг-Ат приводит к удалению связанного Аг из системы. Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации Аг (Aт) в испытуемых образцах.

4. Получение конъюгата.

Конъюгат – это антиген или антитело, «сшитые» с ферментной меткой или белком-носителем. Получение коньюгата – один из важных этапов разработки ИФА.

При синтезе конъюгата с ферментом подбирают такой оптимальный метод введения ферментной метки, чтобы оба компонента конъюгата сохраняли свою биологическую активность: фермент – способность взаимодействовать с субстратом, а антиген или антитело – антигенность и антигенсвязывающую активность, соответственно. Наличие меченого, высокоочищенного антигена позволяет использовать конкурентные методы ИФА. Однако антигены разнообразны по своим физико-химическим свойствам и строению, а значит невозможно разработать универсальные методики для получения конъюгата с антигеном. В этом случае получение конъюгата антигена с ферментом представляет собой отдельную сложную задачу. Приготовление меченых антител для ИФА методически более доступно.

Конъюгирование фермента с иммунохимически активными белками производится различными методами: химическая сшивка, ковалентное связывание молекулы фермента с Аг или Aт и образование соединений через нековалентные связи, например, когда связь между ферментом и Аг или Aт осуществляется иммунологически, через взаимодействие антиген-антитело.

В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие вещества. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.

Иммобилизация антигена или антител на твердой фазе возможна тремя путями:

– пассивная адсорбция, основанная на сильных гидрофобных взаимодействиях между белками и синтетической поверхностью;

– ковалентное прикрепление к твердой фазе;

– иммунохимическое и др. (нековалентное и неадсорбционное присоединение).

Пассивная адсорбция белков широко используется при проведении ИФА на платах для титрования, на нитроцеллюлозных мембранах. Пассивная адсорбция идет по принципу насыщения и коррелирует с молекулярной массой адсорбируемого вещества. В стандартных наборах ИФА используются 96-тилуночные прозрачные полистирольные планшеты.

Контроль ифа что это. Смотреть фото Контроль ифа что это. Смотреть картинку Контроль ифа что это. Картинка про Контроль ифа что это. Фото Контроль ифа что это

Рис. 12. Набор для ИФА-определения наркотических еществ в биологических жидкостях: – планшет с нанесенным антигеном; 2 – положительный и отрицательный контрольный образец; 3 – реагент для выявления образовавшихся иммунных комплексов; 4 – растворы буфера для приготовления анализируемых образцов; 5 – раствор буфера для проведения фермент-субстратного окрашивания; – раствор для остановки реакции окрашивания субстрата; – инструкция по применению

Свободные сайты на поверхности твердой фазы, не связавшиеся с сорбируемым агентом, могут фиксировать в ходе теста другие молекулы, в том числе и конъюгаты, что приводит к повышению фонового сигнала. Для предотвращения неспецифического связывания после иммобилизации на твердую фазу основного материала проводят обработку нейтральными для теста веществами. Наиболее популярные блокирующие агенты – бычий сывороточный альбумин (БСА), казеин и др. Выбор блокирующего агента и условия проведения этого этапа зависят от типа твердой фазы, чувствительности системы.

Готовый набор для ИФА-определения наркотических веществ в биологических жидкостях выглядит следующим образом (рис. 12).

Источник

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *